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不同的層析柱應(yīng)該如何確定上樣量

更新時(shí)間:2017-09-14瀏覽:3733次

   不同的層析柱應(yīng)該如何確定上樣量

  在做層析實(shí)驗(yàn)的時(shí)候可能時(shí)常會(huì)遇到一個(gè)問題:一次實(shí)驗(yàn)可以上多少樣品呢?多也不是少也不是,上樣多了會(huì)造成一部分樣品損失或者達(dá)不到預(yù)期的分離效果,上樣少了無法充分使用層析柱還要增加重復(fù)實(shí)驗(yàn)或者使用更大層析柱,真是件糾結(jié)的事情。我們今天要來給大家介紹的就是不同的層析柱應(yīng)該如何確定上樣量。
  層析柱上樣量由柱體積和所使用填料載量決定
  柱體積(CV):層析柱中裝填的填料的總體積,根據(jù)層析柱的截面積及填料裝填的高度計(jì)算得到。
  載量:填料在一定條件下填料結(jié)合目的分子的能力,分為靜態(tài)載量和動(dòng)態(tài)載量。
  靜態(tài)載量(有效載量)
  在一定的條件下,可以結(jié)合在層析填料上的真實(shí)樣品的數(shù)量,它是使用真實(shí)的樣品和介質(zhì)充分浸潤(rùn)飽和,然后測(cè)定結(jié)合在填料上的樣品總量。pH、離子強(qiáng)度、添加劑以及樣品等因素都會(huì)影響有效結(jié)合載量。實(shí)驗(yàn)條件改變,有效結(jié)合載量也會(huì)變化。
  動(dòng)態(tài)載量
  在一定的運(yùn)行條件下,可以結(jié)合在層析柱上的樣品數(shù)量。除pH,離子強(qiáng)度,添加劑以及樣品以外,運(yùn)行流速也會(huì)影響動(dòng)態(tài)結(jié)合載量。一般來說,流速越低,動(dòng)態(tài)結(jié)合載量越高。如果流速接近于零,動(dòng)態(tài)結(jié)合載量等于有效載量。
  層析都是在一定流速下進(jìn)行的,故填料的動(dòng)態(tài)載量更能有效地用于上樣量的確定。對(duì)于特定填料或?qū)游鲋鶃碚f,說明書都會(huì)給出對(duì)于某種特定蛋白其動(dòng)態(tài)結(jié)合載量,同時(shí)給出相應(yīng)的測(cè)定條件,可作為實(shí)際實(shí)驗(yàn)中上樣量的參考。

 

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